挪威黃金楓和自由人槭組織培養獲得無菌試管苗的研究

槭樹植物是槭樹屬(Acer)的泛稱，其木材質地堅硬，材質細密，是良好的家具、農具、枕木及建筑用材，樹冠冠幅較大，樹姿優美，葉形秀麗，秋季樹葉漸變為紅色或黃色，為著名的秋色葉樹種，是理想的行道樹或城市綠化庭園樹種，在各地風景園林中得到普遍應用。挪威黃金楓(AcerplatanoidesLinnd)和自由人槭(Acerreema-niiAutumnBlaze)是由北美引進的槭樹中的經典品種，該試驗介紹這2種槭樹組織培養初代培養的研究，有效的獲得了2種槭樹的無菌試管苗，為這2種槭樹的組織培養快繁技術研究提供了參考。

1材料與方法

選取飽滿的挪威黃金楓種子和自由人槭頂芽、幼嫩莖段，用清水沖洗2～3h，在超凈工作臺上，去除挪威黃金楓種子外種皮，剪取自由人槭頂芽和幼嫩莖段75%酒精浸潤30s，無菌水沖洗2～3次，0.1%升汞消毒4～12mb清水沖洗3～4次接種于添加2種不同植物生長調節劑的2種不同培養基中(培養基添加蔗糖30g/L、瓊脂6g/L,pH調至5.8，選用正交試驗表L4(23)和L8(27)，試驗因素和水平見表1），放置在溫度22～28℃，光照條件分別為3000～5000lx光照和黑暗的環境中培養，重復3次1周后統計無菌率，2周后，去除污染中毒的統計萌發率，4周后統計萌發芽的成苗率。

2結果與分析

2.1升汞不同消毒時間對無菌率和中毒率的影響

從表2中得出，挪威黃金楓以種子為外植體，升汞消毒時間在8min以上日寸，無菌率達100%,但中毒率隨著消毒時間的增加而增高，升汞消毒時間在8min以下時，無中毒現象，但無菌率隨著時間的減少而降低，升汞消毒時間在8min時無菌率最高，中毒率最低，得出挪威黃金楓以種子為外植體，升汞消毒時間在8min,消毒效果最佳。

自由人槭以頂芽為外植體隨著升汞消毒時間的增加，無菌率也隨著增加，消毒時間在6min以下，中毒率為0，說明隨著升汞消毒時間的增加雜菌被殺死的比率在升高，但消毒時間過長，頂芽的細胞和組織發生了嚴重的中毒現象，升汞消毒時間在6min時，無菌率最高中毒率最低，得出自由人槭以頂芽為外植體，升汞消毒6min消毒效果最佳；自由人槭以幼嫩莖段為外植體日寸，升汞消毒時間較頂芽時間要長，原因是莖段較頂芽木質化程度高，莖段的細胞和組織較耐殺毒且所含的雜菌多，綜合各因素得出，自由人槭以細嫩莖段外植體時，升汞消毒10min,消毒效果最佳。

2.2不同溫度和光照條件對萌發率的影響

由表3得出，挪威黃金楓種子在黑暗條件下，平均萌發率為95.67%，在光照3000～5000lx平均萌發率為91.67%，當溫度在24～26℃時，平均萌發率最高達到96.25%，表明挪威黃金楓種子在黑暗條件下，更有利于種子的萌發，溫度在24～26℃時，適于種子的萌發。同樣，由表3數據得出，自由人槭的頂芽和幼嫩莖段在黑暗條件和有光條件下平均萌發率很接近但在黑暗條件下，頂芽和幼嫩莖段萌發出的芽弱。自由人槭以頂芽為外植體萌發率明顯高于以幼嫩莖段為外植體，原因是頂芽具有頂端優勢，萌動能力強。溫度在24～26℃時，自由人槭以頂芽和幼嫩莖段平均萌發率最高。綜合各因素得出，自由人槭以頂芽為外植體更有利于芽的萌發，溫度在24～26℃光照條件下為最適的培養溫度。

2.3不同培養基和外植體對成苗率的影響

2.3.1不同培養基類型和激素濃度對挪威黃金楓種子成苗率的影響4周后，新芽長出2片子葉，高在1cm以上時，統計挪威黃金楓種子和自由人槭不同外植體成苗率。由表4得出，外植體在MS培養基中的平均成苗率最高達96.5%，細胞分裂素BA為0.5mg/L時，平均成苗率最高達96%，生長素NAA為0.2mg/L時，平均成苗率為95%，略高于生長素為0.1mg/L時的成苗率0綜合3個因素得出，選用MS培養基添加0.5m/L的6～BA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黃金楓種子的成苗。

2.3.2不同培養基類型、激素濃度和外植體對自由人槭成苗率影響由表5得出，自由人槭以頂芽為外植體時平均成苗率最高達97.5%在MS培養基中平均成苗率最高達96%當NAA濃度為0.2mL時平均成苗率最高達96%,當6-BA濃度分別為0.5mg/L和0.2mg/L時，平均成苗率均為95.5%表明6～BA濃度的高低對自由人槭成苗率沒有顯著的影響。綜合各因素得出以頂芽為外植體選用MS培養基添加0.5mg/L或0.2mg/L的6-BA和0.2mg/L的NAA,有利于自由人槭頂芽的成苗。
 

3結論

挪威黃金楓以種子為外植體，0.1%升汞消毒8min,消毒效果最佳，無菌率達100%中毒率為0；自由人槭以頂芽為外植體，0.1%升汞消毒6min,無菌率達95%中毒率為0。挪威黃金楓種子在黑暗條件下，溫度在24～26℃時萌發率最高達98%；自由人槭以頂芽為外植體，溫度在24～26℃光照3000～5000lx條件下為最適的培養條件，平均萌發率最高達97.5%。選用MS培養基，添加0.5mg/L的GBA和0.2mg/L的NAA有利于挪威黃金楓種子的成苗，平均成苗率在95%以上；自由人槭以頂芽為外植體，選用MS培養基，并添加0.5mg/L或0.2mg/L6-BA,0.2mg/LNAA濃度，成苗率在95%以上。

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